Fey masuk ke dunia komedi sebagai pemain utama dalam grup komedi improvisasi yang berbasis di Chicago The Second City. Dia bergabung dengan Saturday Night Live (SNL) sebagai penulis, kemudian menjadi penulis utama dan seorang pemain, tampil sebagai pembawa acara bersama di segmen Weekend Update dan, kemudian, mengembangkan penggambaran satir tentang calon wakil presiden 2008 dari RepublikSarah Palin dalam penampilan tamu berikutnya. Pada tahun 2004, ia ikut membintangi dan menulis skenario untuk Mean Girls, yang merupakan diadaptasi dari buku pengembangan diri tahun 2002 Queen Bees and Wannabes. Setelah meninggalkan SNL pada tahun 2006, Fey menciptakan serial televisi 30 Rock untuk Broadway Video, sebuah sitkom yang secara longgar didasarkan pada pengalamannya di SNL. Dalam serial tersebut, Fey berperan sebagai Liz Lemon, penulis utama serial komedi sketsa fiksi. Pada tahun 2011, ia merilis memoarnya, Bossypants, yang menduduki puncak Daftar Buku Terlaris The New York Times selama lima minggu dan memberinya nominasi Grammy Award. Pada tahun 2015, ia ikut menciptakan serial komedi Unbreakable Kimmy Schmidt. Fey juga menciptakan adaptasi musikal Mean Girls, yang ditayangkan perdana di Broadway pada tahun 2018, dan membuatnya mendapatkan nominasi Penghargaan Tony. Dia kemudian mengadaptasi produksi panggung tersebut menjadi film musikal 2024 dengan judul yang sama.
Fey senang menonton acara komedi sejak usia dini, dan pernah berkata:
Saya ingat orang tuaku membawaku masuk ke bioskop untuk menonton Young Frankenstein ketika aku belum cukup umur. Kami juga menonton Saturday Night Live atau Monty Python, atau film lama Marx Brothers. Ayahku mengizinkan kami berjaga hingga larut malam untuk menonton The Honeymooners. Tapi kami tidak diizinkan untuk menonton The Flintstones, ayahku membencinya karena menurutnya, The Flintstones adalah jiplakan dari The Honeymooners. Bagi orang seusiaku, aku sebenarnya punya pengetahuan yang sangat sedikit tentang Flintstones.[5]
↑Fey bercerita dalam acara Rachael Ray bahwa Zenobia adalah nama keluarga ibunya, tetapi ibunya mengganti nama keluarga menjadi Jean/Jeanne karena nama Zenobia sulit diucapkan. Oleh karena itu, nama tengah anak perempuan Fey adalah Zenobia.
